做ELISA实验，这些技巧少不了!

　　做ELISA实验，这些技巧少不了!

　　介绍：

　　ELISA试剂盒在国内有许多种叫法，例如：ELISA检测试剂盒、ELISA Kit、酶联免疫试剂盒、酶联免疫吸附测定试剂盒、酶联免疫分析试剂盒、酶免试剂盒等，比较常见的叫法是ELISA检测试剂盒、酶联免疫吸附测定试剂盒等。Elisa生物试验是一种敏感性高，特异性强，重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存，操作简便，结果判断较客观等因素，已广泛应用在免疫学检验的各领域中。

　　特点：

　　1.高效、灵敏、特异的抗体。

　　2.稳定的重复性和可靠性。

　　3.吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相载体。

　　4.适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等多种标本类型。

　　5.节省实验经费。

　　操作方法

　　1.标准品的稀释，请按照说明书进行操作。

　　2.根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。

　　3. 加样：不规范的移液操作可能带来误差。

　　1)空白孔，空白对照孔不加样品，生物素标记的抗NE抗体，链霉亲和素-HRP，只加显色剂A&B和终止液，其余各步操作相同;

　　2)标准品孔：加入标准品50ul，链霉亲和素-HRP50ul(标准品中已事先整合好生物素抗体，故不加);

　　3)待测样品孔：加入样本40ul，然后各加入抗NE抗体10ul、链霉亲和素-HRP50ul，盖上封板膜，轻轻震荡混匀，37℃温育60分钟。

　　4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。

　　5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

　　6. 显色：每孔先加入显色剂A50ul，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。

　　7. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。

　　8. 测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后10分钟以内进行。

　　9. 根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。

　　洗板方法

　　一、手工洗板方法：

　　甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次;将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。

　　二、自动洗板：

　　如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。

　　注意事项

　　1.从2-8℃取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

　　2.各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。

　　3.严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准。

　　4.为避免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和封板膜。

　　5.不同批次试剂盒不能混用，如遇试剂不够，请及时联系客服解决

　　6.底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。

　　7.中、英文说明书或许会有不一致之处，请以英文说明书为准。

　　8.保存温度：2-8℃。

　　9.有效期：6个月(2-8℃)。

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