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操作Elisa试剂盒的实验需注意哪些事项

更新时间:2021-08-26    点击次数:694
   ELISA试剂盒自从60-70年代问世以来,得到科研工作者的认可及推崇,在欧美及中国获得很大的推广,尤其是国内生化领域的长足发展。免疫吸附试验(也叫ELISA试剂盒实验) 因其操作简单,灵敏度高,特异性好,经济安全等特点所以在科研界被广泛应用,又因为其操作步骤复杂,一般包括试剂准备,样本收集,加样,温育,洗涤,显色,比色,结果判定等,其中任何一项操作不当都会对检测结果产生很大影响。所以必须加强ELISA检测的全面质量控制,保证其结果的准确可靠。
  Elisa实验结果的影响因素包括检测样品因素、操作因素等。在实验操作的过程中有一些注意事项。下面为大家分享操作Elisa试剂盒的实验需注意哪些事项(供参考):
  1、加样后及时放人孵箱,标本较多时,要分批操作。按说明步骤严格控制操作时间,防止孵育时间人为延长,导致非特异性结合紧附于反应孔周围,难以清洗*。
  2、作时必须戴手套,穿工作衣,严格健全和执行消毒隔离制度。
  3、剩余样品及废弃物应经121℃高压蒸汽灭菌30分钟,或用5.0g/L次氯酸钠等消毒剂处理30分钟后废弃。
  4、同批号试剂组分不得混用。
  5、洗涤时各孔均需加满液体,防止孔口有游离酶不能洗净。
  6、每次实验留一孔作为空白调零孔,该孔不加任何试剂,只是最后加底物溶液及2N H2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。
  7、要确保微量加样器的准确性,可以使用蒸馏水和电子天平进行确定(由于蒸馏水不含杂质,温度环境为20%左右时,lmL的水可以看作是lg、200 L的水可以看作是0.2g)每一把微量加样器都应该将其最高量程和zui低量程进行确定。
  8、在使用微量加样器时,吸取不同瓶子中液体后要更换枪头,即使吸取标准品溶液。
  9、吸取液体时速度不易太快,以免产生气泡,吸取的量不够准确。
  10、手工洗板时每次加入洗涤液后。应静置15~30s,不要将一个酶标孑L中的洗涤液溅入另一酶标孔中,防止交叉污染。甩去洗涤液后将酶标板放在毛巾或吸水纸上拍干。
  11、底物为TMB,避免与皮肤相接触。终止液为2tool的浓硫酸具有腐蚀性,应尽量避免接触皮肤。
  ELISA检测操作步骤较为复杂,影响测定结果的因素的原因也较多,分布在测定操作的各个步骤中,因此必须加强各环节的质量控制,才能得到准确可靠的检测结果。

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