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如何正确使用96孔PCR孔板

更新时间:2022-04-18    点击次数:3183

  如何正确使用96孔PCR孔板

 

  有透明和乳白色可选,其中乳白色更适合用于顶部采集荧光信号的新型荧光定量PCR仪(如伯乐CFX系列,ABI 7500fast 以上型号, Roche 480系列),但如果荧光定量PCR仪是底部光源的,则应选择透明的。

  PCR板根据裙边设计又可分为无裙边、半裙边和全裙边三种设计模式,不同厂家的荧光定量PCR仪会设计不同的切角或边缘凸起,请选择适合该PCR仪的板子。

  PCR板又分100ul体积(矮板)和200ul体积(高板),根据机型的不同选择,选择不同高度孔板,避免高度错误对机器造成破坏和加热不均导致数据失真。

  当使用96孔板做荧光定量PCR实验的时候,推荐使用光学膜代来密封反应孔。正确的封膜方法是:先沿着96孔板的纵向压膜,然后横向,最后沿着板的边缘按压使之密封。具体手法见下面图示:

  加样后会在管壁上飞溅一些小液滴,另外反应体系内也会有一些气泡,需要离心去掉挂壁液滴和气泡。请使用专用的微孔板离心机解决上述问题。

  PCR板属于一次性消耗品,生产一次成型,不建议剪开使用容易造成实验误差增加,不能清洗或部分重复利用。不要为了节省一点小钱,而给实验带来后续分析上的困扰。

  样本量少,用8联管做实验该注意哪些?

  也分乳白和透明两种,选择方式和孔板一样,根据PCR仪的荧光信号采集方式决定。

  8联管同样也有0.1ml(矮管)和0.2ml(高管),根据PCR仪的加热模块体积确定。

  8联管的盖子一般有光学平盖和凸型圆盖之分,光学平盖适用于荧光定量PCR,圆盖适用于普通PCR。

  使用单管或8联管做实验,并且样本数量不多的时候,建议在样品加热块(TRAY)上对称地安放样品,好是纵向放置,并且优先放在第6列或第7列,然后逐渐向两边放置。这样做的好处是热盖压下来的时候不至于发生倾斜,各个反应管的受力和受热都比较均匀,提高孔与孔之间的数据精密性。也可以在加热模块四角的位置,放置4个单管平衡热盖压力,避免扩增少量样本时出现管子变形的情况。

  管盖没有盖好造成PCR反应液热蒸发,影响反应温度的准确控制及反应也各成份的浓度,同时也成为一个污染源。不但会因压盖时由于粗心或者用力不均致使部分盖子变形,而且还会造成样品的交叉污染,所以我们推荐用独立管盖的8联管,每管盖一体,确保样本独立反应,避免交叉污染。

  如何正确使用96孔PCR孔板! 九游代理一直视质量控制为企业的生命,追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承:遵纪守法,严于律己,宽仁以待,敢于承担的企业精神作为标准,以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场,较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢,是我们的发展目标。九游代理!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作,共创美好的未来。

 

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