动物细胞培养中动物血清的作用

　　①提供细胞生存和增殖所必需的生长调节因子。

　　②补充基础培养基中没有或量不足的营养成分。

　　③含有一些可供贴壁细胞型细胞贴壁生长的基质成分。

　　④提供载体蛋白，可结合维生素、脂质、金属离子等。

　　⑤在一些情况下，中和毒性物质保护细胞不受伤害。

　　⑥给培养液提供良好的缓冲系统。

　　⑦提供蛋白酶抑制剂，保护细胞免受死细胞释放的蛋白酶的伤害。

　　但是血清也存在一些弊端，比如存在不少有害成分（补体、免疫球蛋白和一些生长抑制因子等）；血清成分不明确，影响对结果的分析；不同动物、不同批次的血清成分和活性有很大不同，使得培养结果不稳定。

　　尽管如此，血清仍然是培养液中基本的添加物，尤其是在原代培养或细胞生长状态不良时，常常会先使用有血清的培养液进行培养，待细胞生长旺盛后再换成无血清培养液。

　　血清中含有蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素等，其中蛋白质主要为白蛋白和球蛋白。氨基酸有多种，是细胞合成蛋白质的基本成分，其中有些氨基酸动物细胞本身不能合成（称为必需氨基酸），必须由培养液提供。血清激素有胰岛素、生长激素等及多种生长因子（如表皮生长因子、成纤维细胞生长因子、类胰岛素生长因子等）；血清还含有多种未知的促细胞生长因子、促贴附因子及其他活性物质，能促进细胞的生长、增殖和贴附。因此，细胞培养时，要保证细胞能够顺利生长和增殖，一般需添加10%～20%的血清，动物血清还可起到酸碱度缓冲液的作用.

　　动物血清保存的注意事项：

　　一、需要长期保存的血清必须储存于-20℃ - 70℃ 低温冰箱中.4℃冰箱中保存时间切勿超过1个月.由于血清结冰时体积会增加约10%,因此,血清在冻入低温冰箱前,必须预留一定体积空间,否则易发生污染或玻璃瓶冻裂.

　　二、热灭活是指56℃, 30分钟加热已*解冻的血清.加热过程中须规则摇晃均匀.此热处理的目的是使血清中的补体成分（complement）灭活.除非必须,一般不建议作此热处理,因为热处理会造成血清沉淀物显著增多,而且还会影响血清的质量.补体参与反应有:细胞毒作用, 平滑肌细胞收缩, 肥大细胞和血小板释放组胺, 增强吞噬作用, 促进淋巴细胞和巨噬细胞发生化学趋化和活化.

　　三、瓶装血清解冻需采用逐步解冻法:-20℃ 至 -70℃ 低温冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室温,待全部溶解后再分装.在溶解过程中需不断轻轻摇晃均匀（小心勿造成气泡）,使温度与成分均一,减少沉淀的发生.切勿直接将血清从-20℃进入37℃解冻,这样因温度改变太大,容易造成蛋白质凝集而出现沉淀.

　　四、一般厂商提供的血清为无菌,无需再过滤除菌.如发现血清有悬浮物,则可将血清加入培养液内一起过滤,切勿直接过滤血清.

　　五、血清中的沉淀物 絮状物:主要是血清中的脂蛋白变性及解冻后血清中纤维蛋白造成,这些絮状物不会影响血清本身的质量.可用离心3000rpm, 5分钟去除,也可不用处理. 显微镜下"小黑点":经过热处理过的血清,沉淀物的形成会显著增多.有些沉淀物在显微镜下观察象"小黑点",常误认为血清受污染.一般情况下,此小黑点不会影响细胞生长,但如果怀疑血清质量,则应立即停止使用,更换另一批号的血清.

　　六、切勿将血清在37℃放置太久,否则血清会变得浑浊,同时血清中的有效成分会破会而影响血清质量.