大家来了解下，细胞冻存的注意事项!

　　大家来了解下，细胞冻存的注意事项!

　　细胞冻存是利用细胞冻存管，将细胞放在低温环境，减少细胞代谢，以便长期储存的一种技术。细胞冻存是细胞保存的主要方法之一，起到了细胞保种的作用。不妨来看看BUNSEN九游代理小编的详解：

　　细胞冻存与复苏：

　　一般来说，细胞进行转移，最佳的策略是进行低温保存，而细胞深低温保存的基本原理是：在-70℃以下时，细胞内的酶活性均已停止，即代谢处于*停止状态，故而可以长期保存

　　1、从增殖期到形成致密的单层细胞以前的培养细胞都可以用于冻存，但为对数生长期细胞。在冻存前天尽量换培养液;

　　2、将冻存管放入液氮容器或从中取出时，要做好防护工作，以免冻伤;

　　3、冻存和复苏尽量用新配制的培养液。

　　细胞冻存：

　　目前细胞冻存多采用甘油或二甲基亚砜作保护剂，这两种物质能提高细胞膜对水的通透性，加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，从而减少由冰晶形成的细胞损伤。

　　1、10%的DMSO+90%胎牛血清。甘油一般用于菌种保存很少用于细胞冻存。

　　2、取对数生长期的细胞，用胰蛋白酶把单层生长的细胞消化下来，悬浮生长的细胞则直接将细胞移至15ml离心管中。

　　3、离心1000 rpm,5 min.

　　4、去除胰蛋白酶及旧的培养液，加入适量配制好的冻存培养液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，计数，调节冻存液中细胞的最终密度为5x10^6/ml~1x10^7/ml.

　　5、 在冻存管上标明细胞的名称，冻存时间及操作者。

　　6、 冻存：标准的冻存程序为降温速率-1~-2℃/min;当温度达到-25℃以下时，可增至-5℃~-10℃/min;到-100℃时，则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2h，然后放入-70℃冰箱中过夜，取出冻存管，移入液氮容器内。

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