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ELISA检测中TGF-β1样本处理方法简介

更新时间:2023-06-06    点击次数:1361

  ELISA检测中TGF-β1样本处理方法简介


  近段时间以来,很多客户来电询问关于TGF-β1样本的处理方法,为了更好的让客户了解整个过程,BUNSEN九游代理整理以供参考。

  由于机体内表达的 TGF-β1是无活性同型二聚体的前体分子,在机体外,无活性的TGF-β1又称为latency associated peptide (LAP),在酸性条件下进行预处理即可获得有活性的TGF-β1,从而用于ELISA检测。

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  TGF-β1血清、血浆样本的活化处理步骤

  1、 取40 μL样本,加入2 mL EP管或者西林瓶中。

  2、 加入20 μL 1N HCl于涡旋仪上混合均匀,室温静置10 min

  3、 加入20 μL 1N NaOH, 混匀。

  4、 根据样本实际情况,对样本进行适当稀释后进行检测。

  注:样本测值计算时应乘以总体稀释倍数(含活化稀释和活化后稀释)

  TGF-β1细胞上清/尿液样本的活化处理步骤

  1、 取100 μL细胞培养上清或尿液, 加入20 μL 1N HCl于涡旋仪上混合均匀

  2、 室温静置10 min

  3、 加入20 μL 1N NaOH, 混匀后即可进行检测

  提醒:以上两个步骤中活化了的样本需在2h内完成检测才能保证实验结果的准确性。细胞培养基中的动物血清可能含有一定浓度的TGF-β1,因此在检测细胞培养上清时,尽量选择不含有动物血清的细胞培养基。如若使用了含有动物血清的细胞培养基,务必将细胞培养基作为对照进行检测,确定培养基中TGF-β1的浓度,最终在计算细胞培养上清中的TGF-β1浓度时减去培养基中TGF-β1的浓度方为实际样本浓度

  活化试剂的配制:

  1、 1 N HCl (100mL): 将 8.33mL 的 12M HCl缓慢加入到 91.67mL 的去离子水中,混合均匀后即可使用。

  2、 1N NaOH/0.5M HEPES (100mL):将 10mL浓度为10M NaOH加入80mL的去离子水中,混合均匀后再加入 11.9g 的 HEPES,混匀,用去离子水定容至100mL备用.

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