Elisa小课堂：ELISA试剂盒酶联免疫吸附测定类型及操作过程

　　Elisa小课堂：ELISA试剂盒酶联免疫吸附测定类型及操作过程

　　ELISA试剂盒双抗体夹心法检查抗原

　　双抗体夹心法是检查抗原zui常用的办法，但要留意的是在一步法(待测抗原与酶标抗体一同参加反响)测定中，当标本中受检抗原的含量很高时，过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体，而不再构成“夹心复合物"呈现钩状效应，乃至可不显色而呈现假阴性成果。因而在使用一步法试剂测定标本中含量可反常增高的物质(例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等)时，应留意可测规模的zui高值。用高亲和力的单克隆抗体制备此类试剂可削弱钩状效应。 双抗体夹心法测抗原的另一留意点是类风湿因子(RF)的搅扰。RF是一种本身抗体，多为IgM型，能和多种动物IgG的Fc段。用作双抗体夹心法检查的血清标本中如富含RF，它可充任抗原成份，一同与固相抗体和酶标抗体，表现出假阳性反响。双抗体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子抗原，但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原，因其不能构成两位点夹心。

　　双抗体夹心法的扼要操作过程为：

　　1)先参加抗体，使抗体固定于载体外表;

　　2)再加样品，使目标检查抗原构成抗原-抗体复合物;

　　3)加酶标抗抗体(第二种动物抗抗原的酶标抗体);

　　4)参加酶促反响底物，发作显色反响，显色的深浅与待测抗原的量成正比。

　　ELISA试剂盒竞赛法检查抗原

　　当小分子抗原或半抗原因缺少可作夹心法的两个以上的抗体位点，因而不能用双抗体夹心法进行测定，能够选用竞赛法形式。办法的基本原理可见图2，经洗刷后分成两组：一组加酶符号抗原和被测抗原的混合液，而另一组只加酶符号抗原，再经孵育洗刷后加底物显色，这两组底物降解量之差，即为所要测定的不知道抗原的量。小分子激素、药物等ELISA测定多用此法。

　　竞赛法的扼要操作过程：

　　1)先参加抗体，使抗体固定于载体外表;

　　2)参加梯度浓度比例的待测样品与酶标抗原混合物,一同做只加酶标抗原的对照组;

　　3)参加酶促反响底物，发作显色反响，比照实验组及对照组的显色区别，计算不知道抗原的量。

　　双抗原夹心法检查抗体

　　双抗原夹心法的反响形式与双抗体夹心法相似。用特异性抗原进行包被和制备酶物，以检查相应的抗体。与间接法测抗体的不一样之处为以酶标抗原代替酶标抗抗体。此法中受检标本不需稀释，可直接用于测定，因而其敏感度相对高于间接法。乙肝标志物中抗HBs的检查常选用本法。本法关键在于酶标抗原的制备，应根据抗原构造的不一样，寻觅适宜的符号办法。

　　双抗原夹心法的扼要操作过程为：

　　1)先参加抗原，使抗体固定于载体外表;

　　2)再加样品，使目标检查抗体构成抗原-抗体复合物;

　　3)加酶标抗原;

　　4)参加酶促反响底物，发作显色反响，显色的深浅与待测抗体的量成正比。

　　间接法检查抗体

　　间接法是检查抗体常用的办法。其原理为使用酶符号的抗抗体(辣根过氧化物酶符号的兔抗人免疫球蛋白抗体)以检查与固相抗原的受检抗体(人免疫球蛋白)，故称为间接法。本法主要用于对病原体抗体的检查而进行流行症的确诊。间接法的长处是只需改换包被抗原就可使用同一酶标抗抗体树立检查相应抗体的办法。

　　间接法的扼要操作过程：

　　1)将特异性抗原与固相载体联合，构成固相抗原;

　　2)加稀释的受检血清，保温反响。血清中的特异抗体与固相抗原，构成固相抗原抗-体复合物;3)加酶标抗抗体;

　　4)参加酶促反响底物，发作显色反响，显色的深浅与待测抗体的量成正比。

　　ELISA试剂盒竞赛法检查抗体

　　竞赛法测抗体的反响形式与竞赛法测抗原相似。用特异性抗原进行包被和制备酶物，以检查相应的抗体。当抗原材料中的搅扰物质不易除去，或不易得到满足的纯化抗原时，可用此法检查特异性抗体。其原理为标本中的抗体和一定量的酶标抗体竞赛与固相抗原。标本中抗体量越多，在固相上的酶标抗体愈少，因而阳性反响呈色浅于阴性反响。如抗原为高纯度的，可直接包被固相。竞赛法测抗体有多种形式，可将标本和酶标抗体与固相抗原竞赛，抗HBc ELISA通常选用此法。另一种形式为将标本与抗原一同参加到固相抗体中进行竞赛，洗刷后再参加酶标抗体，与在固相上的抗原反响。抗HBe的检查通常选用此法。

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