Elisa实验：双抗夹心法、间接法、竞争法优缺点对比

　　Elisa实验：双抗夹心法、间接法、竞争法优缺点对比

　　优点：

　　双抗夹心法：高灵敏、高专一性，抗原无须事先纯化，孵育2次，操作简单，减少人为因素的影响，可靠的特异性。

　　间接法：二抗可以加强信号，而且有多种选择能做不同的测定分析。不加酶标记的一级抗体则能保留它最多的免疫反应性。

　　竞争法：可适用比较不纯的样本，而且数据再现性很高。

　　竞争法 此法可用于抗原及半抗原的定量测定，也可用于测定抗体。以测定抗原为例，将特异性抗体吸附于固相载体上，加入待测抗原和一定量的已知酶标抗原，使二者竞争地与固相抗体结合，经过洗涤分离，zui后结合于固相的酶标抗原与待测抗原含量呈负相关。

　　缺点：

　　双抗夹心法：缺少链霉亲和素的抗体，起不到型号放大作用，而且抗原一定得拥有两个以上的抗体结合部位。

　　间接法：要经过三次孵育，操作步骤繁琐，稍微不注意会导致操作误差，交互反应发生的机率较高。间接法 此法是检测抗体常用的方法。将已知抗原吸附于固相载体上，加入待测血清(抗体)与之结合，洗涤后，加酶标抗体和底物进行测定。

　　竞争法：竞争法对于手法要求非常高，整体的敏感性和专一性都较差。

　　双抗体夹心法测抗原：双抗体夹心法是检测抗原zui常用的方法，适用于测定二价或二价以上的大分子抗原，但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原，因其不能形成两位点夹心。

　　双抗原夹心法测抗体：反应模式与双抗体夹心法类似。用特异性抗原进行包被和制备酶结合物，以检测相应的抗体。与间接法测抗体的不同之处为以酶标抗原代替酶标抗抗体。此法中受检标本不需稀释，可直接用于测定，因此其敏感度相对高于间接法。乙肝标志物中抗HBs的检测常采用本法。本法关键在于酶标抗原的制备，应根据抗原结构的不同，寻找合适的标记方法。

　　间接法：是检测抗体zui常用的方法，本法主要用于对病原体抗体的检测而进行传染病的诊断。

　　竞争法测抗体：当抗原材料中的干扰物质不易除去，或不易得到足够的纯化抗原时，可用此法检测特异性抗体。其原理为标本中的抗体和一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合。抗HBe的检测一般采用此法。

　　竞争法测抗原：小分子抗原或半抗原因缺乏可作夹心法的两个以上的位点，因此不能用双抗体夹心法进行测定，可以采用竞争法模式。其原理是标本中的抗原和一定量的酶标抗原竞争与固相抗体结合。标本中抗原量含量愈多，结合在固相上的酶标抗原愈少，后的显色也愈浅。小分子激素、药物等ELISA测定多用此法。

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