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一、细胞培养基发展历史
细胞体外培养初期使用的培养基,都是天然培养基,也就是组织提取物或者体液,如血浆、血清、淋巴液、胚胎浸出液等,直到20世纪50年代Parke、Eagle等人,设计出化学成分明确的合成培养基:MEM培养基和DMEM培养基,这两种培养基直到现在还被人们广泛使用。在此基础上,科学家们发现,在合成培养基中添加血清,可以使细胞维持更高的活细胞密度和更长的培养时间。随着血清成分的不断明确,科学家们逐步开始研发无血清培养基,减少血清对细胞培养的影响。
二、细胞培养基组成成分及功能
1、氨基酸
氨基酸是培养基中主要的氮源物质,也是重要的能源物质。
2、维生素
一般培养基中含有的维生素有:①脂溶性维生素:如A、D、E、K等;②水溶性维生素:如B、C、叶酸、烟酰胺等。培养基中添加维生素可以适合更多细胞系的生长。
3、无机盐
无机盐是维持培养基渗透压平衡的主要物质,它还可以调节细胞膜功能,无机盐主要包括:Ca2+、Mg2+、Cl-、Na+、K+等。
4、碳水化合物
细胞培养基中的碳水化合物通常被用作细胞的能量来源,常用的有葡萄糖、丙酮酸钠等。
5、脂类
脂类物质作为有机能量的来源,可以满足细胞新陈代谢的需求,也可以支持细胞生长和存活,培养基中的脂类物质主要有:胆固醇、乙醇胺、亚油酸等。
6、激素
激素类物质主要包含:胰岛素、生长激素、肾上腺素等,可以促进细胞生长、提高细胞增殖能力,
7、微量元素
细胞培养基中微量元素主要有:铜、锰、锌、硒等,这些微量元素对细胞无蛋白长期稳定培养具有重要作用。
8、特殊添加物
蛋白水解物、酵母水解物等这些特殊添加物可以起到抗氧化剂、抗剪切剂、刺激抗体表达等作用。
9、缓冲体系
通常细胞培养基中会添加HEPES、磷酸盐等缓冲物质,可以调节培养基pH、渗透压等。
三、培养基种类
1、BME细胞培养基:适用于各种传代细胞系。
2、MEM细胞培养基:适合多种细胞单层生长。
3、DMEM细胞培养基:根据葡萄糖含量可以分为低糖和高糖2种类型,低糖适用于培养贴壁依赖性细胞,高糖适用于高密度悬浮细胞培养。
4、DMEM/F12细胞培养基:适用于原代细胞培养及难培养细胞。
5、M199细胞培养基:适用于培养多种种属来源的细胞及能转染的细胞。
6、IMDM细胞培养基:适用于高密度细胞的快速增殖培养。
7、RPMI-1640细胞培养基:适用于悬浮细胞、淋巴细胞等细胞培养。
8、HamF10细胞培养基:适用于克隆化培养。
9、McCoy5A细胞培养基:适用于原代细胞培养、淋巴细胞培养以及一些难培养的细胞。
10、L15细胞培养基:适用于快速增殖的肿瘤细胞培养。
四、培养基保存方法
1、液体培养基
液体培养基应于2-8℃冰箱保存,实验前放入37℃预热。
2、干粉培养基
2-8℃冰箱避光保存。
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