人活性氧 (ROS) 酶联免疫分析试剂盒使用说明书

人活性氧 (ROS) 酶联免疫分析试剂盒使用说明书

  本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：0.3ng/mL - 8ng/mL

  规格：96T  48T 

  货号：BS-9689-A   BS-9689-B

使用目的：

本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中活性氧 (ROS) 含量。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人活性氧(ROS)水平。用纯化的人活性氧(ROS) 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入活性氧 (ROS)，再与 HRP  标记的活性氧 (ROS) 抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜 色的深浅和样品中的活性氧 (ROS) 呈正相关。用酶标仪在 450nm波长下测定吸光度 (OD  值)，通过标准曲线计算样品中人活性氧 (ROS) 浓度。

试剂盒组成：

标本要求：

1 ．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能 马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的 (HRP) 活性。

操作步骤：

1.     标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀 释。

2.     加样：分别设空白孔 (空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、 待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl，待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，

然后再加待测样品 10μl  (样品最终稀释度为 5 倍) 。加样将样品加于酶标板孔底部，尽 量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.     温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

4.     配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

5.    洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此 重复 5 次，拍干。

6.     加酶：每孔加入酶标试剂 50μl ，空白孔除外。

7.     温育：操作同 3。

8.     洗涤：操作同 5。

9.     显色：每孔先加入显色剂 A50μl ，再加入显色剂 B50μl ，轻轻震荡混匀，37℃避光显色

10 分钟.

10.   终止：每孔加终止液 50μl ，终止反应 (此时蓝色立转黄色)。

11.   测定：以空白孔调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度 (OD 值) 。  测定应在加终止

液后 15 分钟以内进行。

操作程序总结：

计算：

以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的 OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD 值计算出标 准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

注意事项

1 ．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未 用完，板条应装入密封袋中保存。

     2 ．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3 ．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好 控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4 ．  请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高 (样本 OD 值 大于标准品孔第一孔的OD 值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数 (n 倍) 后再测定，计 算时请最后乘以总稀释倍数 ( ×n×5)。

    5 ．  封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

    6 ．底物请避光保存。

   7 ．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

   8 ．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

    9 ．本试剂不同批号组分不得混用。

保存条件及有效期

1 ．试剂盒保存：；2-8℃。

2 ．有效期：6 个月

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