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Elisa操作要点:ELISA实验双抗体夹心法操作步骤

更新时间:2023-11-17    点击次数:1607

  Elisa操作要点:ELISA实验双抗体夹心法操作步骤

 

  一、标准品稀释及样品准备

  样本离心4℃,1000Xg,5min

  标准品离心4℃,10000Xg,1min

  1mL稀释液溶解标准品,静置1-2min,取7支空EP管,每管加入500μL标准品&样品稀释液,静置后标准品混匀,将液体离心至底部(800Xg,1min)

  取同体积标准品原液稀释,涡旋混匀,BUNSEN九游代理试剂盒 依次倍比稀释标准品,最后一管为空白

  二、酶标板拆分

  可按照实验需求拆装板条,让板条松动并轻推底部,拆下板条防止在备用板框上,剩余板条防至铝箔袋,封口存放。

  

 

  三、标准品及样本点样

  由低到高浓度,每孔100μL,悬空加入(建议均设置复孔)

  处理后样品取上清溶液,悬空,每孔100μL,腹膜后标记。提前预热,注意温度,37℃孵育90min。

  四、生物s化抗体工作液制备

  取适量生物素化抗体稀释液,加入浓缩液,稀释100倍后,颠倒混匀20次,待用。

  取出酶标板,勿触摸板条底部,BUNSEN九游代理试剂盒 甩尽孔内液体后,拍干。将工作液倒入加样槽,悬空垂直加入,100μL/孔,腹膜后标记,37℃孵育60min。

  五、1x洗液配制

  根据需求取双蒸水适量,取25x浓缩洗涤液适量,加入烧杯,磁力搅拌器混匀5-10min。

  六、浓缩HRP酶结合物工作液制备

  取适量HRP酶结合物稀释液,加入浓缩液,稀释100倍后,颠倒混匀20次,备用

  取出酶标板,勿触摸板条底部。轻撕覆膜,避免液体溅出。参数设定:洗涤次数3次、洗板条数12条、洗涤液量350μL/孔、震板5s。拍干液体,更换吸水纸。将工作液倒入加样槽,悬空垂直加入,100μL/孔,腹膜后标记,37℃孵育30min。

  七、显色

  平衡取出酶标板勿触摸板条底部,轻撕覆膜,避免液体溅出,参数设定。洗涤次数5从,洗板条数12条,洗涤液量350μL/孔,震板5s。拍干液体,更换吸水纸。

  将底物溶液倒入加样槽,悬空垂直加入,90μL/孔,腹膜后标记,37℃孵育15-30min。

  八、终止反应

  平衡取出酶标板,切勿触摸板条底部,显色后前四孔出现明显蓝色剃度。轻撕覆膜,避免液体溅出。悬空垂直加入,50μL/孔,加入终止液时可看到蓝色立转为黄色。

  九、数据处理

  轻轻擦拭板底,放入酶标仪中,上机操作。

  标签:标准品 ELISA 抗体 九游代理 标准品 酶标板 稀释液

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