干货解析：对于ELISA终止液您了解多少?

　　干货解析：对于ELISA终止液您了解多少?
 

　　细胞氧化应激的定量评价方法大致分做三类：

　　1)测定由活性氧修饰的化合物;

　　2)测定活性氧消除系统酶和抗氧化物质的量;

　　3)测定含有转录因子的氧化应激指示物。

　　进一步尚有：

　　1)生物体内氧化应激的程度足以产生应答;

　　2)活体内难以蓄积;

　　3)在活体内不是被代谢，而是稳定存在，等等。理解这些要点对于临床普及推广都很有用。

　　细胞增殖-毒性检测实验操作步骤

　　终止液是用于测定细胞增殖或毒性实验中活细胞数目的一种高灵敏度，无放射性的比色检测法。CCK法应用非常广泛，如药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等。下面以BUNSEN的CCK8试剂盒为例，简要说明细胞增殖-毒性检测的操作步骤

　　方法/步骤

　　在96孔板中配制100μl的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养 24 小时 (在 37℃，5% CO2 的条件下)。

　　向培养板加入 10μl 不同浓度的待测物质。

　　将培养板在培养箱孵育一段适当的时间 (例如: 6,12, 24 或 48 小时)。

　　向每孔加入 10μl CCK8 溶液 (注意不要在孔中生成气泡，它们会影响 OD 值的读数)。

　　5. 将培养板在培养箱内孵育 1-4 小时。

　　用酶标仪测定在 450 nm 处的吸光度。

　　如果暂时不测定OD值，打算以后测定的话，可以向每孔中加10μl0.1 M HCl溶液或者1%wSDS 溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化 。

　　细胞周期检测的原理：

　　PI法是经典的周期检测方法。PI为插入性核酸荧光染料，能选择性的嵌入核酸DNA和RNA双链螺旋的碱基之间与之结合，其结合的量与DNA的含量成正比例关系，用流式细胞仪进行分析，就可以得到细胞周期各个阶段的DNA分布状态，从而计算出各个期的百分含量。PI染色后，假设G0/G1期细胞的荧光强度为1，那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2，正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1-2之间。

　　常用的细胞染色方法有:

　　1.简单染色法,常用碱性染料如美蓝等进行简单染色;

　　2.革兰氏染色法,主要包括结晶紫初染、碘液媒染、乙醇(或丙酮)脱色以及番红复染四个过程;

　　3.瑞氏染色法,瑞氏染料溶剂主要是由伊红美蓝组成;

　　4.吉姆萨染色法,吉姆萨染色原理与结果和瑞特染色法基本相同;

　　5.细胞免疫荧光染色法,免疫荧光染色的主要原理是利用抗原抗体之间的特异性结合。

　　蛋白提取/定量

　　蛋白提取频道,提供蛋白提取实验用蛋白提取试剂盒，蛋白裂解液，蛋白浓度测定试剂盒等蛋白质实验用试剂及耗材。其中蛋白提取系列包括：植物蛋白提取试剂盒，细胞组织蛋白提取试剂盒，胞膜/细胞核蛋白提取试剂盒，全蛋白提取试剂盒等。

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标签：终止液 试剂盒 Elisa 试剂 指示物 96孔板 培养板 培养箱