BUNSEN讲解：超滤离心管知识问答

　　BUNSEN讲解：超滤离心管知识问答

　　1、问：超滤管的主要用途?

　　答：浓缩含有抗原、抗体、酶、核酸(单株或双株DNA/RNA样本)、微生物、洗出液和净化样本的生物样本。

　　2、问：如何选择合适的超滤管?

　　答：通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量为35kDa，就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量为10kD左右，则可以用截留分子量3kD的超滤管。

　　3、问：超滤管对那些化学物质具有耐受性?

　　答：适用于生物液体及水溶液样本，具体的一些化学试剂的相容性，详见说明书。

　　4、问：超滤管主要有什么组成?

　　答：括一个盖子、一个过滤器和一个离心管

　　5、问：超滤管需要预处理吗?

　　答：新买的超滤管是干燥的并且含有微量甘油。可用缓冲液或Millipore水预清洗。如果干扰仍然存在，用0.1 N NaOH清洗，然后用缓冲液或Millipore水再次清洗后甩干。

　　6、问：超滤管可以重复使用吗?

　　7、答：可以，一般也就用一两次就换新的，先用缓冲液洗涤，再用去离子水反复洗涤。残留蛋白杂质多时，可以0.1N NaOH 清洗以及0.1% SDS清洗，去除和溶解蛋白质及其他杂质的。然后将超滤离心管的超滤膜泡在叠氮钠溶液或20%的乙醇溶液中，防止长菌，而且防干，一旦润湿后应避免重新干燥，在干燥会影响滤膜的孔径。

　　注意：不可以用超声洗涤!清洗过程枪头一定不能碰到滤膜。

　　8、问：如何达到转速和离心的平衡?

　　答：质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快，否则直接损坏超滤膜。开始离心超滤(离心机预冷至4度)。不同离心机的转速 rpm换算成g之后，有所不同。具体可参阅附件里的说明书。离心机的加速度调至低档，减小对膜的压力。

　　注意：在实际使用中，一般转速开的比说明书里的要低，这样可以延长离心管的使用寿命。

　　9、问：为什么离心过程会发生堵管?

　　答：若发生沉淀，要确定沉淀的具体原因，是蛋白浓度过高还是缓冲液不合适，若是蛋白浓度可用多个超滤管同时超滤，降低蛋白浓度;若是缓冲液不合适，需要跟换合适的缓冲液，直到蛋白不发生沉淀。

　　10、问：超滤管是无菌的吗?

　　答：不是

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