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土壤酸性蛋白酶活性检测试剂盒分光光度法

简要描述:土壤酸性蛋白酶活性检测试剂盒分光光度法九游代理九游代理生物公司供应:ELISA试剂盒,动物血清,荧光定量PCR耗材,移液器吸嘴,微量离心管,进口冻存管,细胞培养皿,培养板,培养瓶,进口吸头,仪器及手套,色谱耗材,针头过滤器等。

  • 产品型号:BC0860 50T/24S
  • 产       地:天津市
  • 更新时间:2023-02-21
  • 访  问  量:2012
详细介绍
品牌其他品牌产地国产
级别其他

  土壤酸性蛋白酶活性检测试剂盒分光光度法 天津九游代理

  中文名称:土壤酸性蛋白酶活性检测试剂盒

  储存条件2-8℃

  单位盒

  有效期6个月

  英文名称Soil Acid Protease Activity Assay Kit

  检测方法可见分光光度法 Spectrophotometer

  规格50T/24S

  产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

  试剂名称 规格 保存条件

  试剂一 液体 20 mL×1 瓶 2-8°C保存

  试剂二 粉剂×1 瓶 2-8°C保存

  试剂三 液体 12 mL×1 瓶 2-8°C保存

  试剂四 液体 40 mL×1 瓶 2-8°C保存

  试剂五 液体 10 mL×1 瓶 2-8°C保存

  试剂六 液体 15 mL×1 瓶 2-8°C保存

  标准品 液体 1 mL×1 支 2-8°C保存

  溶液的配制:

  1、 试剂二:临用前加入 10 mL 试剂六,沸水浴搅拌溶解后待用,用不完的试剂 2-8°C保存 1 个月。

  2、 标准品:20μmol/mL 酪AN酸溶液。

  产品说明:

  土壤蛋白酶参与土壤中存在的氨基酸、蛋白质以及其他含蛋白质氮的有机化合物的转化,其水解产物是高等植物的氮源之一。土壤酸性蛋白酶在酸性环境下催化蛋白质水解,与土壤有机质含量、氮素及其他土壤性质有关。酸性条件下,土壤酸性蛋白酶可将酪蛋白水解产生酪AN酸;在碱性条件下,酪an酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝,在680nm有特征吸收峰。

  Casein Tyrosine Phosphomolybdic acid + Tyrosine Tungsten blue 680nm

  注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者

  增加样本量进行检测。

  需自备的仪器和用品:

  可见分光光度计、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液枪、1mL玻璃比色皿、台式离心机、研钵、蒸馏水、30-50

  目筛。

  操作步骤:

  一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)新鲜土样自然风干或 37°C烘箱风干,过 30~50 目筛。

  二、测定步骤

  Soil acid protease,H+OH-

  1、 分光光度计预热30min 以上,调节波长至680nm,蒸馏水调零。

  2、 标准溶液的稀释:取10μL 20μmol/mL酪an酸标准液,加入990μL蒸馏水,充分混匀,配制成0.2μmol/mL标准液使用,现用现配。(实验中每管需要220μL,为减小实验误差,故配制大体积。)

  3、 样本测定

  试剂名称 测定管 对照管 标准管 空白管

  风干土样(g) 0.1 0.1 - -

  试剂一(μL) 200 200 - -

  试剂二(μL) 100 - -

  充分混匀后,37°C水浴/恒温培养箱中反应24h,期间振荡5-6 次,

  使土样与反应液充分接触。 - -

  试剂三(μL) 200 200 - -

  试剂二(μL) - 100 - -

  混匀,10000rpm 室温离心10min,取上清液待测 - -上清液(μL) 220 220 - -

  0.2μmol/mL标准液(μL) - - 220 -

  蒸馏水(μL) - - - 220

  试剂四(μL) 650 650 650 650

  试剂五(μL) 130 130 130 130

  混匀,40°C水浴或恒温培养箱培养 10min,10000rpm 室温离心 10min,取上清液于 680nm 下读取各管吸光值 A,分别记为 A 测定管、A 对照管、A 标准管、A 空白管,计算ΔA 测定=A 测定管-A 对照管,ΔA标准=A 标准管-A 空白管。(标准管、空白管只需测 1-2 次,每个测定管需设一个对照管)

  三、土壤酸性蛋白酶活性计算

  单位定义:每天每g土样中产生1μmol的酪an酸为一个土壤酸性蛋白酶活力单位。

  土壤酸性蛋白酶(U/g 土样)=C标准×ΔA测定÷ΔA标准×V反总÷W÷T=0.1×ΔA测定÷ΔA标准÷W

  C标准:标准管浓度,0.2μmol/mL;V反总:反应体系总体积,0.5mL;T:反应时间,1d;W:样本质量,g。

  注意事项:

  当吸光值大于1时,建议将上清液用蒸馏水稀释后进行测定,计算时注意乘以稀释倍数。

  实验实例:

  1、 分别称取 2 份 0.1g 土样于 1.5mLEP 管中,分别为对照管及测定管。按照测定步骤操作,使用 1mL 玻璃比色皿 测 定 吸 光 度 , 计 算 ΔA 测 定 =A 测 定 管 -A 对 照 管 =0.206-0.178=0.028 , ΔA 标 准 =A 标 准 管 -A 空 白 管=0.540-0.028=0.512,按土壤质量计算酶活得:

  土壤酸性蛋白酶(U/g 土样)= 0.1×ΔA 测定÷ΔA 标准÷W= 0.1×0.028÷0.512÷0.1= 0.0547U/g 土样。

  2、 分别称取 2 份 0.1g 三叶草土样于 1.5mLEP 管中,分别为对照管及测定管。按照测定步骤操作,使用 1mL 玻璃比色皿测定吸光度,计算ΔA 测定=A 测定管-A 对照管=0.831-0.612=0.219,ΔA 标准=A 标准管-A 空白管=0.540-0.028=0.512,按土壤质量计算酶活得:

  土壤酸性蛋白酶(U/g 土样)= 0.1×ΔA 测定÷ΔA 标准÷W= 0.1×0.219÷0.512÷0.1=0.0313 U/g 土样。

  相关系列产品:

  BC0880/BC0885 土壤碱性蛋白酶(S-ALPT)活性检测试剂盒

  测定意义:土壤蛋白酶参与土壤中存在的氨基酸、蛋白质以及其他含蛋白质氮的有机化合物的转化,其水解产物是高等植物的氮源之一。S-ACPT 在酸性环境下催化蛋白质水解,与土壤有机质含量、氮素及其他土壤性质有关。

  测定原理:酸性条件下,S-ACPT 可将酪蛋白水解产生酪an酸;在碱性条件下,酪an酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝;在680nm 有特征吸收峰。

  所需仪器及设备:可见分光光度计、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、1mL 玻璃比色皿、蒸馏水。

  备注:

  以上数据均来自公开文献, 暂未进行独立验证, 仅供参考。

  土壤酸性蛋白酶活性检测试剂盒分光光度法 九游代理生物公司供应:荧光定量PCR耗材,细胞培养类,核酸提取耗材,试剂包装类,生物试剂,色素,原料,抗原抗体,试剂盒等,通用耗材包括深孔板、96孔硅胶垫、吸头、封板膜、玻片、试管、量杯、试剂槽、离心管、移液器等。


 


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