猪游离血红蛋白(F-Hb)ELISA试剂盒

　　猪游离血红蛋白(F-Hb)ELISA试剂盒技术说明

　　检测范围：0.6μg/ml -22μg/ml

　　96T

　　使用目的： 猪游离血红蛋白(F-Hb) ELISA试剂盒用于测定猪全血样本中游离血红蛋白(F-Hb)含量。

　　实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中猪游离血红蛋白(F-Hb)水平。用纯化的猪游离血  红蛋白(F-Hb)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入游离血红蛋白 (F-Hb)，再与 HRP  标记的游离血红蛋白(F-Hb)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物， 经过*洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP  酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下 转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的游离血红蛋白(F-Hb)呈正相关。用酶标仪在 450nm  波长下测定吸光度(OD 值)，通过标准曲线计算样品中猪游离血红蛋白(F-Hb)浓度。

　　标本要求

　　1.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

　　2.不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

　　操作步骤

1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

   

　　2.  加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样  50μl，待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl(样品终稀释度为 5  倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

　　3. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

　　4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

　　5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 后弃去，如此重复 5 次，拍干。

　　6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。

　　7. 温育：操作同 3。

　　8. 洗涤：操作同 5。

　　9. 显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 10 分钟.

　　10. 终止：每孔加终止液 50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。

　　11. 测定：以空白孔调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。

　　猪游离血红蛋白操作程序总结：

　　计算

　　以标准物的浓度为横坐标，OD  值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的 OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD  值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

　　注意事项

　　1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

　　2.浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

　　3.各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间好控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

　　4.  请每次测定的同时做标准曲线，好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD 值 大于标准品孔一孔的 OD  值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定，计算时请后乘以总稀释倍数(×n×5)。 5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

　　6.底物请避光保存。

　　7.严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

　　8.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

　　9.本试剂不同批号组分不得混用。

　　保存条件及有效期

　　1.试剂盒保存：;2-8℃。

　　2.有效期：6 个月

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